摘要
目的:探讨血清LncRNA MAGI2-AS3、miR-374b-5p表达水平与前列腺癌患者Gleason 分级评分的相关性。方法：选取2021年11月—2023年11月于本院接受治疗的前列腺癌患者(n=110)作为前列腺癌组，另选取同期在本院体检的良性前列腺疾病患者(n=110)作为对照组。采用实时荧光定量-聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清中 LncRNA MAGI2-AS3、miR-374b-5p 表达；采用Spearman 法分析血清LncRNA MAGI2-AS3、miR-374b-5p与Gleason 分级评分的相关性；采用Pearson 法分析血清LncRNA MAGI2-AS3与miR−374b−5p 的关系;采用多因素Logistic回归分析影响前列腺癌发生的因素。结果:与对照组相比，前列腺癌组患者血清 LncRNA MAGI2-AS3 表达水平降低(P<0.05),miR−374b−5p 表达水平升高(P<0.05)。前列腺癌患者血清LncRNA MAGI2-AS3与miR-374b-5p表达水平呈负相关（r=−0.673，P<0.05）。多因素Logistic 回归分析显示LncRNA MAGI2-AS3高水平是影响前列腺癌发生的保护因素(P<0.05)，miR-374b-5p高水平是影响前列腺癌发生的危险因素(P<0.05)。与低危组相比，中危组、高危组血清 LncRNA MAGI2-AS3 表达水平依次降低(P<0.05)，miR-374b-5p表达水平依次升高(P<0.05)。前列腺癌患者血清 LncRNA MAGI2-AS3 与 Gleason 分级评分呈负相关(rs=−0.497，P<0.05)，miR-374b-5p表达水平与Gleason 分级评分呈正相关(rs=0.456，P<0.05)。结论：前列腺癌患者血清LncRNAMAGI2-AS3表达水平显著降低，miR-374b-5p表达水平显著升高，与Gleason分级评分有关。
关键词
Abstract
Objective To explore the correlation between the expression levels of serum LncRNA MAGI2-AS3 and miR-374b-5p and Gleason grading score in patients with prostate cancer. Methods Prostate cancer patients (n=110)) who received treatment at our hospital from November 2021 to November 2023 were collected as the prostate cancer group, and benign prostate disease patients (n=110) who underwent physical examination were as the reference group. Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction (qRT-PCR) was applied to detect the expression of LncRNA MAGI2-AS3 and miR−374b−5p in serum; Spearman method was applied to analyze the correlation between serum LncRNA MAGI2-AS3, miR-374b-5p and Gleason grading score; Pearson method was applied to analyze the relationship between serum LncRNA MAGI2 -AS3 and miR−374b−5p multivariate Logistic regression was applied to analyze the factors influencing the occurrence of prostate cancer.Results Compared with the reference group, the serum LncRNA MAGI2-AS3 expression level in the prostate cancer group decreased (P<0.05), while the miR−374b−5p expression level increased (P<0.05). The serum LncRNA MAGI2-AS3 and miR−374b−5p expression levels in prostate cancer patients were negatively correlated (r=−0.673, P<0.05). Multivariate Logistic regression analysis showed that LncRNA MAGI2-AS3 was a protective factor affecting the occurrence of prostate cancer (P<0.05)and miR−374b−5p was a risk factor affecting the occurrence of prostate cancer (P<0.05). Compared with the low -risk group, the serum LncRNA MAGI2 -AS3expression level in the medium and high-risk groups decreased sequentially (P<0.05), and the miR-374b-5p expression level increased sequentially (P<0.05). The serum LncRNA MAGI2-AS3 in prostate cancer patients was negatively correlated with Gleason grading score (rs=−0.497,P<0.05), and the expression level of miR-374b-5p was positively correlated with Gleason grading score (rs=0.456,P<0.05). Conclusion The expression level of serum LncRNA MAGI2-AS3 in prostate cancer patients is greatly reduced, while the expression level of miR-374b−5p is greatly increased, which are related to Gleason grading score.
Keywords
前列腺癌作为全球高发恶性肿瘤之一，多发于中老年男性，数据统计显示，全球前列腺癌的每年发病率和死亡率均较高，对男性生命健康产生严重威胁[1-2]。前列腺癌初期症状较为隐匿，无特异性临床症状，但随着病情的进展，出现侵袭和转移[3]。临床上很难对前列腺癌进行根治，严重影响患者的预后[3-4]。因此寻找与前列腺癌患者 Gleason 分级有关的生物标志物，可以更好地评估患者病情的严重程度，对改善患者预后具有重要意义。LncRNA MAGI2-AS3是近年来新发现的lncRNA，在多种癌症（肺癌、鼻咽癌、乳腺癌等）中发挥重要调节作用[5-7]。研究显示，微小RNA（miRNA）参与机体多种癌症的发生和进展，miR-374b-5p与乳腺癌等恶性肿瘤的进展有关[8-10]。目前关于 LncRNA MAGI2-AS3、miR-374b−5p 对前列腺癌的影响还不清楚。因此，本研究通过测定 LncRNA MAGI2-AS3、miR-374b-5p在前列腺癌患者血清中的表达，分析两者与前列腺癌Gleason 分级的关系，以期为前列腺癌的临床诊治和预后评估提供有效的生物靶标。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2021年11月—2023年11月本院收治的前列腺癌患者（n=110）作为前列腺癌组，纳入标准:1）经活检穿刺结果确诊为前列腺癌[11]；2）首次接受前列腺癌根治手术或放、化疗等其他治疗；3）临床资料完整。排除标准：1）合并其他恶性肿瘤；2）泌尿系统存在感染；3）重要脏器功能不全者；4）免疫功能缺陷者；5）存在传染性疾病。另选取同期在本院治疗的良性前列腺疾病患者（n=110）作为对照组。本研究获得本院伦理委员会批准，患者及家属均签署知情同意书。
1.2 方法
1.2.1 实时荧光定量-聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测血清中LncRNA MAGI2-AS3、miR-374b-5p表达水平
采集两组患者人院当日空腹外周静脉血5mL，3000r/min 离心10min，收集血清于−80℃ 冰箱保存备用。采用Trizol试剂提取总 RNA，并测定浓度与纯度；然后使用逆转录试剂盒制备cDNA；以cDNA为模板，经qRT-PCR检测样品中LncRNA MAGI2−AS3、miR−374b−5p表达水平。LncRNA MAGI2-AS3 检测以 GAPDH 为内参，miR−374b−5p 检测以 U6 为内参，反应体系20μL :Super SYBR Mix 10μL，上下游引物（10μmol/L）各1μL，cDNA 2μL，ddH2O 6μL。qRT-PCR 检测程序：95℃预变性3min，然后95℃ 30s，58℃ 30s，72℃ 30s，循环40次。以2−ΔΔCt法计算LncRNA MAGI2-AS3、miR-374b-5p相对表达量。Trizol试剂盒、逆转录试剂盒均购自美国赛默飞公司，操作均严格按照试剂盒说明书进行。引物序到见表1。
表1qRT-PCR引物序列
1.2.2 Gleason分级评分
Gleason分级采用5级10 分制的表示方法，包括主要结构级别和次要结构级别。将前列腺癌患者按照 Gleason 分级评分划分为3组，其中Gleason评分≤6分为低危组（n=32），Gleason评分7分为中危组（n=43）、Gleason评分8~10分为高危组（n=35）。
1.3 统计学分析
数据采用SPSS25.0软件进行分析，计数资料以n（%）表示，两组间比较行χ2检验；计量资料以 表示，两组间比较行t 检验。多组比较采用单因素方差分析，组间进一步两两比较采用SNK−q 检验；采用Spearman法分析血清LncRNA MAGI2−AS3，miR−374b−5p与 Gleason 分级评分的相关性；采用Pearson法分析血清LncRNA MAGI2-AS3与miR−374b−5p 的相关性；采用多因素Logistic回归分析影响前列腺癌发生的因素。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组一般资料比较
与对照组相比，前列腺癌组年龄、体质量指数（BMI）心率等指标无统计学差异（P>0.05），见表2。
表2两组一般资料比较
2.2 两组血清LncRNA MAGI2-AS3与miR-374b-5p 表达水平比较
与对照组相比，前列腺癌组患者血清LncRNA MAGI2-AS3表达水平降低（P<0.05），miR-374b-5p表达水平升高（P<0.05），见表3。
表3两组血清 LncRNA MAGI2-AS3与 miR-374b-5p 表达水平比较
注：a与对照组比较，P<0.05
2.3 前列腺癌患者血清LncRNA MAGI2-AS3与miR−374b−5p 表达水平的相关性
通过TargetScanHuman网站预测LncRNA MAGI2-AS3与miR−374b−5p 间存在结合位点，见图1。前列腺癌患者血清 LncRNA MAGI2-AS3与miR-374b-5p 表达水平呈负相关（r=−0.673，P<0.05），见图2。
图1LncRNA MAGI2-AS3与miR-374b-5p间结合位点
图2前列腺癌患者血清LncRNA MAGI2-AS3与miR-374b-5p水平的相关性
2.4 多因素Logistic回归分析影响前列腺癌发生的因素
以前列腺癌是否发生为因变量（1=发生，0=未发生），以 LncRNA MAGI2-AS3，miR-374b-5p表达水平为自变量，均为连续变量，进行多因素Logistic回归分析，结果显示，LncRNA MAGI2-AS3高水平是影响前列腺癌发生的保护因素（P<0.05），miR-374b-5p高水平是影响前列腺癌发生的危险因素（P<0.05），见表4。
表4多因素Logistic 回归分析前列腺癌发生的影响因素
2.5 不同Gleason 分级的血清LncRNA MAGI2-AS3，miR−374b−5p 表达水平
与低危组相比，中危组、高危组血清LncRNA MAGI2-AS3表达水平降低（P<0.05），miR-374b-5p表达水平升高（P<0.05）。与中危组比较，高危组的血清LncRNA MAGI2-AS3表达水平降低（P<0.05），miR-374b-5p 表达水平升高（P<0.05），见表5。
表5不同Gleason 分级的血清LncRNA MAGI2-AS3、miR-374b-5p表达水平
注：a与低危组比较，P<0.05；b与中危组比较，P<0.05
2.6 血清 LncRNA MAGI2-AS3、miR−374b−5p 与Gleason分级评分的相关性
前列腺癌患者血清LncRNA MAGI2-AS3与Gleason分级评分呈负相关（rs=−0.497，P<0.05），miR−374b−5p 表达水平与Gleason分级评分呈正相关（rs=0.456，P<0.05），见图3、4。
图3血清 LncRNA MAGI2-AS3 与 Gleason 分级评分的相关性
图4血清 miR-374b-5p与 Gleason 分级评分的相关性
3 讨论
前列腺癌是由前列腺上皮细胞恶性增生引起的恶性肿瘤，随着老龄化进程日渐加剧，其发病率呈逐年上升趋势[12]。前列腺癌的发病率在男性恶性肿瘤中仅次于肺癌，位居第二，对男性身心健康产生严重威胁[13-14]。因此，探寻与前列腺癌 Gleason 分级有关的生物学标志物对评估患者病情进展，提高患者救治率有着至关重要的作用。
长链非编码RNA是一类不具有蛋白质编码能力的长链内源性细胞RNA（包含超过200个核苷酸）[15-16]。近年来发现，大量 LncRNA 具有特异性功能，可影响疾病的发病机制或肿瘤形成[17]。Hu等[18]研究表明，LncRNA MAGI2-AS3在前列腺癌患者血清中表达下调，可以通过靶向抑制 miR-142-3p，进而影响前列腺癌进展。Yang等[19]研究表明，LncRNAMAGI2-AS3在前列腺癌组织中异常降低，并且与Gleason分级评分和淋巴结状态呈负相关。本研究发现，与对照组相比，前列腺癌组患者血清LncRNA MAGI2-AS3表达水平降低，说明LncRNA MAGI2-AS3可能是与前列腺癌有关的潜在生物标志物，其水平降低发生前列腺癌的可能性增加。另外，与低危组相比，中危组、高危组血清LncRNA MAGI2-AS3表达水平依次降低。前列腺癌患者血清LncRNA MAGI2-AS3与Gleason分级评分呈负相关，提示LncRNA MAGI2-AS3可能影响前列腺癌的发生和发展，低表达不利于疾病的转归。推测其原因可能是由于LncRNA MAGI2-AS3低表达促进了前列腺癌细胞的增殖和迁移。
miRNA在前列腺癌中起着重要作用[20]。在多种癌症中观察到miR-374b-5p的异常表达[21-22]。Pang 等[23]研究发现，miR-374b-5p 可通过调节下游基因而起到致癌作用，miR-374b-5p高表达有利于癌细胞的增殖和分化，与正常人群和前列腺增生患者相比，前列腺癌患者血清miR−374b−5p 表达水平显著升高。秦策等[24]研究表明，miR-374b-5p 为前列腺癌的致癌基因，上调miR-374b-5p可能会通过介导UHNK1的表达促进前列腺癌 PC-3 细胞增殖，并抑制凋亡，导致恶性生物学效应水平升高。本研究发现，与对照组相比，前列腺癌组患者血清miR-374b-5p 表达水平升高。提示了血清miR-374b-5p 水平异常可能与前列腺癌发生有关，其水平升高提示前列腺癌发生的风险增大。另外，与低危组相比，中危组、高危组血清miR-374b-5p表达水平依次升高；且前列腺癌患者血清miR-374b-5p表达水平与Gleason分级评分呈正相关。提示了LncRNA MAGI2-AS3可能与前列腺癌恶性程度有关。
通过TargetScanHuman网站预测LncRNA MAGI2-AS3与miR-374b-5p间存在结合位点。前列腺癌患者血清LncRNA MAGI2-AS3与miR-374b-5p 表达水平呈负相关。Kortam 等[25]研究发现，LncRNA MAGI2-AS3调控miR−374b−5p 表达可以影响多发性硬化症，表明LncRNA MAGI2-AS3与miR-374b-5p间可能存在靶向作用。多因素Logistic 回归分析结果显示，LncRNA MAGI2-AS3是影响前列腺癌发生的保护因素，miR-374b-5p是影响前列腺癌发生的危险因素。这些结果说明了LncRNA MAGI2-AS与miR-374b-5p可能在前列腺癌的发生进展中发挥重要的调节作用。
综上所述，前列腺癌患者血清LncRNA MAGI2-AS3表达水平显著降低，miR-374b-5p表达水平显著升高，与Gleason分级评分有关，为指导临床了解患者病情进展提供了依据。然而，本研究对LncRNA MAGI2-AS3、miR-374b-5p在前列腺癌发展中的具体作用机制尚未探讨，需要更大的样本量和进一步的研究来探究。